注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
3,3',5-三碘甲腺原氨酸鈉價格Anti-MMP1 Antibody研究領域 腫瘤 心血管

D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽使用說明書Anti-MMP1 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學 信號轉(zhuǎn)導 激酶和磷酸酶

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BOC-D-亮氨酸價格Anti-MMP11 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學

BOC-L-羥脯氨酸保存Anti-MMP11 Antibody研究領域 腫瘤 心血管 信號轉(zhuǎn)導 細胞外基質(zhì)

CBZ-甘氨酸保存Anti-MMP10 Antibody研究領域 腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 細胞骨架 細胞外基質(zhì)

對氯苯甘氨酸保存Anti-MMP10 Antibody研究領域 腫瘤

Rink Amide AM樹脂保存Anti-MMP12 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 細胞膜受體 新陳代謝

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半胱氨酰甘氨酸保存Anti-MMP13 Antibody研究領域 心血管 細胞生物 免疫學

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葡聚糖T500實驗步驟Anti-MMP14 Antibody研究領域 微生物學

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R7632-5GVitamin A 維生素A(350IU/mg)127-47-95g

PVP封片液10ml

MUP, Diwo7ium, Trihydrate1g

三扶乙酸tnifluoeeti ei7進口　HPLC500ml

LXH-1000100-1000 μl 吸頭盒154

R3501-1GRifampicin 利福平13292-46-11g

DAB, Tetraxy7chloride10g

肖鑭(III) 合物25g

大鼠胰島素樣蛋白3(INSL3)ELISA試劑盒 ，英文名： INSL3 ELISA Kit

Mouse urokinase type plasmigen activator (uPA) ELISA Kit 小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒

Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanCoisolELISAKit人皮質(zhì)醇規(guī)格：48T/96T

細胞BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMP-7大鼠骨成型蛋白7規(guī)格：48T/96T
鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒規(guī)格Manganese moxide通用試劑　100G

Manganese acetate tetrahydrate通用試劑　10G

Manganese carbonate通用試劑　250G

Manganese　nitrate solution通用試劑　500G

Benzylmagnesium Bromide通用試劑　25ML

Magnesium bromide通用試劑　5G

Magnesium perchlorate hexahydrate通用試劑　50G

Magnesium bromide hexahydrate通用試劑　100G

Magnesium ethoxide通用試劑　100G

anhydrous magnesium perchlorate通用試劑　100G

EDTA—disodium magnesium salt,≥98%通用試劑　25G

Magnesium carbonate basic通用試劑　250G

Magnesium sulfate anhydrous通用試劑　25G

Magnesium nitrate hexahydrate通用試劑　25G

Magnesium stearate通用試劑　250G
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。