注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
異虎耳草素482-27-9價(jià)格Anti-CTPS1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶

異綠原酸B14534-61-3實(shí)驗(yàn)方法Anti-CTPS1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶

澤瀉醇A醋酸酯 8674-16-3 實(shí)驗(yàn)方法Anti-CTSB Antibody研究領(lǐng)域  染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

植酸83-86-3實(shí)驗(yàn)方法Anti-CTLA4 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué)

紫草酸28831-65-4 實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CTSE Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

靈芝酸A?81907-62-2*Anti-CTU1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 激酶和磷酸酶

細(xì)辛脂素133-05-1*Anti-CTSV Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 細(xì)胞凋亡

三尖杉寧堿 71610-00-9 實(shí)驗(yàn)方法Anti-Cul1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶

5,7-二羥基色原酮31721-94-5*Anti-CTU1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

左旋肉堿 541-15-1實(shí)驗(yàn)方法Anti-CUL2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 細(xì)胞膜受體

遼東楤木皂苷V 340963-86-2實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CUL3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 細(xì)胞膜受體

遠(yuǎn)志口山酮162857-78-5*Anti-CUL5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

L-瓜氨酸價(jià)格Anti-CUL7 Antibody

低范圍RNA Ladder保存Anti-CUL9 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

D-賴氨酸價(jià)格Anti-CUX1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

3-溴苯甲酯  庚烷磺酸鈉一合物  2-甲硫基噻唑

2-甲基磺酰  己烷磺酸鈉一合物  2-乙氧基吡嗪

4,5-二-2-  戊烷磺酸鈉單合物  硫代糠酸甲酯

1--2,4-二-5-硝基苯  3-羥基-1,2,3,4-四氫苯并[h]  硫代丙酸糠酯

(6R-(6alpha,7))-((Ami-1,4-cyclohexadien-1-ylacetyl)ami)-3-methyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid  頭孢拉定  38821-53-3

2-Methyl-2-pentenal  2-甲基-2-戊烯醛  623-36-9

Dexamethasone-17-acetate  醋酸地塞米松  1177-87-3

Clonidine hydrochloride  鹽酸可樂(lè)定  4205-91-8

大鼠支鏈α-酮酸脫氫酶(BCKDK)ELISA試劑盒 ，英文名： BCKDK ELISA Kit

Sophora japonica agglinin (SJA) ELISA Kit 槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒

Mouseierleukin10,IL-10ELISAKIT 小鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumangolgiprotein73,GP-73ELISAKit人高爾基蛋白73規(guī)格：48T/96T

無(wú)激素精制胎牛血清100毫升

ELISAKitTAb大鼠甲狀腺素抗體規(guī)格：48T/96T
阪崎腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse anti-oligodendrocyte-myelin glycoprotein antibody,OMgp-Ab ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit*

小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Nerve growth factor,NGF ELISA Kit *

小鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit*

小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse neuropeptide Y,NP-Y ELISA Kit*

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit 進(jìn)口/分裝
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。