注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Benzyltrimethylammonium bromide2-硝基噻吩 98%2,4,6-三氟苯酸 96%

3-(2-Amiethylami)propyldimethoxymethylsilane四溴噻吩 99%2-(三氟甲基)苯酸  97%

Polyquaternium-10噻吩-2,3-二甲 98%4-三氟甲氧基苯酸  98%

THAM鹽酸胍 分子生物學(xué)級，99.5%3-(三氟甲氧基)苯酸  98%

BIS-TRIS propane鹽酸胍 99.5%2-(三氟甲氧基)苯酸 97%

TRIS-HC1鹽酸胍 蛋白變性，99.5%2,4,5-三溴咪唑 98%

TRIS acetate salt鹽酸胍 AR,99.0%3,4,5-三氟苯酸 97%

Tris carbonate鹽酸胍 CP,98.0%2,3,4-*氧基苯酸 98%

CAPS硫酸胍 99%2-酸 98%

CAPSO聚烯酰胺 非離子型，分子量：200萬-1400萬3-酸 97%

CAPSO sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 97%3,4,5-*氧基苯酸 97%

CAPS Sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 分析標準品間三氟酸 97%

PIPES2,4-二氯苯氧乙酸標準溶液 1000mg/L，基體：甲3-乙烯基苯酸 96%

PIPES sesquisodium salt2,5-二氯苯氧乙酸標準溶液100μg/ml，溶劑：甲4-乙烯基苯酸 96%

POPSO2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物細胞培養(yǎng), ≥98%（GC)二甲苯 CP，98%(二甲苯異構(gòu)體+乙基苯）

POPSO-2Na過氧化脲素 97%二苯胺 AR,99.0%

扎西他濱,2',3'-二脫氧胞苷HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Bio  生物素標記的兔抗小鼠IgG-Fc

玉米素核苷 PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/APC  APC標記的兔抗小鼠IgG-Fc

齊留通PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/AP  堿性磷酸酶（AP）標記的兔抗小鼠IgG-Fc

齊留通（標準品）MERIT40 (D7Y5K) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgG-Fc

依諾沙星(溶性）Phospho-TPOR (Tyr626) (D3H7B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgG-Fc

氧氟沙星uPAR (D7X2N) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠IgG-Fc

氧氟沙星（標準品）Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠IgG-Fc

阿巴卡韋  Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit anti-mouse IgG-Fc fragment whole serum  兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清

阿巴卡韋 (標準品)Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc  兔抗小鼠IgG-Fc

煙酰胺/尼克酰胺/維生素B3Toll-like Receptor 6 (D1Z8B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/RBITC  羅丹明標記的兔抗小鼠IgG
諾氏瘧原蟲PCR檢測試劑盒說明書人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克

人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃150毫克

人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人前白蛋白(PA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人前病毒整合位點1(Pim1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人前列環(huán)素(PGI)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。