組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
TCPA2-溴-4-甲基吡啶 97%氯乙酰胺 99%

2-Methylbenzothiazole3-丁基吡啶 98%1,5-二羥基萘 98%

5-Nitrobenzimidazole1,2-雙(*基硅氧基)乙烷 95%二 99%

Beryllon I3-溴基叔丁基二甲基硅  97%1,5-萘二磺酸，四 97%

Beryllon II2-(3-溴基)四氫-2H-吡喃 97%2,7-萘二磺酸鈉 CP

Graphite powder(S,S)-(+)-N,N′-雙(3,5-二-叔丁基亞楊基)-1,2-環(huán)已二胺 98%1，5-萘二磺酸鈉 98%

Permutit(R,R)-(−)-N,N′-雙(3,5-二叔丁基亞楊基)-1,2-環(huán)已二胺 氟酸銨 97%

Soda lime3-羧基苯酸 99%氟酸銨 99.5% metals basis

Sea sand三苯基氯硅烷 95%氟酸銨 99.99% metals basis

Lipofectamine 2000 Transfection Reagent3-氯過氧苯甲酸 75%氟酸銨 99.995% metals basis

Cinchonine3-氯過氧苯甲酸 85%氟酸銅 45%溶液

Rhodanine2-氯-5-硝基吡啶 99%氟酸鉛 50%溶液

Diethyl oxalate4-基苯酸 97%氟酸 AR,99.0%

Iodine4-羥基苯酸 97%氟酸鈉 AR,99.0%

Chinese red2-基-6-甲基吡啶 97%氟酸亞錫 50% w/w溶液

Bentonite2-氯-3-吡啶甲 97%氟酸鈉 99.99% metals basis

3-氨基-4-羥基苯甲酸(>97.0%(HPLC)(T))ACSL1 AntibodyInhibin beta A/Activin A  抑制素βA抗體 Inhibin βA

反-2-[3-(4-叔丁基苯基)-2-甲基-2-亞烯基]二(>98.0%(HPLC)(N))M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAbInhibin Alpha  抑制素α抗體 Inhibin α

α-基-4-羥基肉桂酸(>98.0%(HPLC)(T))M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAbING1/p33  生長抑制因子基因1抗體

3,5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸(>99.0%(GC)(T))THEX1 AntibodyInfluenza A virus (Duck)  鴨流感病毒抗體

2,5-二羥基苯甲酸(>99.0%(GC)(T))Tris-Glycine SDS Running Buffer (10X) INCA1  INCA1蛋白抗體

4'-羥基偶氮苯-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAbImportin4/RanBP4  核蛋白4抗體（Ran結(jié)合蛋白4）

3-羥基-2-吡啶甲酸(>98.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAbImportin 9/RanBP9  核蛋白9抗體（Ran結(jié)合蛋白M）

4'-羥基苯偶氮基-4-羧酸合物(>98.0%(HPLC)(T))THEX1 (D2B4) Rabbit mAbIMPDH2  5'肌苷磷酸脫氫酶2抗體

3-吲哚烯酸(>98.0%(HPLC)(T))PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbIMPDH1  肌苷單磷酸脫氫酶1抗體

2',4',6'-三羥基苯乙酮一合物(>98.0%(GC))PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbIMPAD1  肌單磷酸酶IMPA3抗體
對蝦桿狀病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶抗體2-Acetyl-3-ethylpyrazine中文名：2-乙?；?3-乙基吡嗪別名：分子式：C8H10N2O

E Tag標(biāo)簽抗體2-Ami-6-ethoxybenzothiazole中文名：2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑別名：分子式：C9H10N2OS

內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶抗體N-Acetyl-L-tryptophan中文名：N-乙酰-L-色氨酸別名：分子式：C13H14N2O3

酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體L-Carsine中文名：L-肌肽別名：分子式：C9H14N4O3

轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體N-Acetyl-D-tryptophan中文名：N-乙?；?D-色氨酸別名：分子式：C13H14N2O3