組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
白當(dāng)歸素(標(biāo)準(zhǔn)品）RPA32/RPA2 Antibody2-庚酮

白果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)STAMBP Antibody芐基哌鹽酸鹽

白花前胡（標(biāo)準(zhǔn)品）STAMBP Antibody四亞甲基二

環(huán)杷明;環(huán)巴;去氧芥芬(標(biāo)準(zhǔn)品）Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁二

白樺脂Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁炔二

白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品）IRF-5 (E1N9G) Rabbit mAb (PE Conjuga)N-基二

白樺脂（標(biāo)準(zhǔn)品）COX IV (3E11) Rabbit mAb (HRP Conjuga)環(huán)己烷

白樺脂酸（標(biāo)準(zhǔn)品）HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6-氟色滿-2-羧酸

白樺脂酸cPLA2 (D49A7) Rabbit mAb5-氨基間二甲酸

白蠟樹素（標(biāo)準(zhǔn)品）Renin Antibody溴吲哚酮

白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（標(biāo)準(zhǔn)品）ASXL1 (D1B6V) Rabbit mAb3,二羥基甲酸

白術(shù)內(nèi)酯III（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-TCTP (Ser46) Antibody硝基鄰甲酚 OR 2-甲基-酚

白頭翁皂苷B4（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-Connexin 43 (Ser368) (D6W8P) Rabbit mAb2-甲基-溴甲酸甲酯

百秋李Phospho-AMPKα (Thr172) (40H9) Rabbit mAb (Biotinylad)溴-2-甲酸甲酯

百蕊草素I；山柰酚-葡萄糖鼠李糖苷；阿福豆苷(標(biāo)準(zhǔn)品）Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (violetFluor™ 450 Conjuga)2-氨基-酚

寶藿苷I,羊藿次苷II(標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)間二甲酰

貝母素甲（標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)1,二

貝母素（標(biāo)準(zhǔn)品）NF-κB2 p100/p52 (D9S3M) Rabbit mAb(Boc-氨基)吡咯烷

APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白CCR6/CD196/FITC  熒光素標(biāo)記趨化因子受體6IgG100 ul

甲胎蛋白（包被）CCR-7/FITC  熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體7IgG100 ul

甲胎蛋白(檢測)CCR-8 /FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體8IgG20 ul

ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1CCR-9/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體9IgG100 ul

芳香烴受體CCR-10/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體10IgG100 ul

吸引素CCRK/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞周期相關(guān)激酶IgG100 ul

腺苷三酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1CD2/FITC  熒光素標(biāo)記CD2IgG20 ul

蛋白激酶B2CD2AP/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞分化抗原CD2APIgG100 ul

血管生成素2SLAMF9/CD2F-10/FITC  熒光素標(biāo)記CD2F-10IgG100 ul
鼠疫桿菌(YP)核酸試劑盒價格鹵酸脫鹵酶樣解酶域內(nèi)含蛋白1A抗體3α-Angeloyloxypterokaurene L3中文名：別名：分子式：C25H36O5

His 結(jié)構(gòu)域內(nèi)含酪氨酸磷酸酶蛋白抗體Dodolide中文名：別名：分子式：C20H24O3

多聚腺苷酸因子Clp1蛋白抗體9α,13α-Epidioxyabiet-8(14)-en-18-oic acid中文名：別名：分子式：C20H30O4

肌球蛋白重鏈抗體Bisandrographolide C中文名：別名：分子式：C40H56O8

HECT E3泛素鏈接酶抗體Kaureic acid中文名：貝殼杉烯酸別名：分子式：C20H30O2